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  • 小鼠明矾OVA致哮喘模型
小鼠明矾OVA致哮喘模型

小鼠明矾OVA致哮喘模型

  • 产品描述:哮喘是一种由多种炎症细胞及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病,气道炎症、平滑肌功能紊乱和气道重塑是哮喘的主要病理改变,发病率呈逐年增加趋势。
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哮喘是一种由多种炎症细胞及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病,气道炎症、平滑肌功能紊乱和气道重塑是哮喘的主要病理改变,发病率呈逐年增加趋势。
1.实验动物
Balb/C小鼠或C57小鼠,雄性,周龄为4w~6w,体重为20g~22g。
2.实验分组
实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。
3.主要试剂
卵蛋白(OVA)
明矾
4.实验周期
6W
5.建模方法
1.明矾致敏佐剂:10%明矾溶液(溶于双蒸水)2ml与500ug/ml OVA(溶于PBS)2ml等量混合后,用NAOH调PH值为6.5,室温孵育60min,750r/min,离心5min,去掉上清液,重溶于2ml PBS。致敏时每只小鼠腹腔注射200ul,其中含2mg明矾和100ug OVA。
2.致敏:小鼠分别于第0、14天时腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml,对照组注射相同剂量的PBS溶液,正常饮食饲养。
3.激发:雾化吸入,第21天时小鼠放入AER动物雾化给药系统,5% OVA雾化吸入。每天30min,共7d,最后一次致敏后24h内检测。以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。对照组采用PBS雾化吸入,其他操作均相同。
4.末次激发24h麻醉小鼠,摘眼球取血,室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清,放入-80冰箱冻存。取左肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色;右肺组织液氮冷冻,-80℃保存用于分生标本。
6.模型评估:
1.一般观察 哮喘模型组大鼠在激发开始后出现打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、哮鸣音、腹肌收缩、烦躁等典型哮喘发作症状,并且后期观察中发现饮食减少、毛色无光泽、行动迟缓及体重逐渐下降。

气道高反应检测:
采用侵入式测量方法-气道阻力和肺顺应性检测系统测量造模后和对照组的气道阻力和肺顺应性的变化

采用无创的方式,全身体积描记系统测量造模前后的呼吸指标的变化,如Te呼气时间、FEF峰值流速、Penh

2.支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集最后1次激发24 h后(第28天)将各组小鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下分离气管,结扎左主支气管后,剪开右主支气管插入气管导管并固定,无菌生理盐水灌洗3次, 1mL/次,收集的BALF于4℃1200 r.min-1离心5 min,弃去上清液, PBS重悬细胞沉淀并涂片,进行细胞分类。
3.肺组织病理学
取左肺组织用4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋, 4μm切片,HE染色。正常组支气管无明显炎症细胞浸润,结构正常。哮喘组可见弥漫性细小支气管和血管周围炎性细胞浸润,其中嗜酸细胞显著增多。气道上皮有不同程度脱落,支气管豁膜上皮杯状细胞增生,管腔内可见豁液栓及炎性渗出,支气管平滑肌显著增厚,血管周围水肿。
4..细胞因子的检测:
模型组血清中IL-25、IL-4的含量显著高于对照组。采用ELISA试剂盒检测血清中IL-25、IL-4的含量。


客户提供:
1、客户提供具体实验方案要求
2、相关干预的药品及方法

结果交付:
1、原始实验结果及分析,或直接提供模型动物
2、详细实验报告,操作过程,模型鼠记录表



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